Emily Hampshire est née le 29 août 1981 à Montréal, Canada. Elle fait ses premiers pas à la télévision à 13 ans, dans Fais-moi peur ! (Are You Afraid of the Dark ?) et revient en 1996 pour un autre épisode. On la retrouve par la suite dans plusieurs films et séries, même si l’actrice est beaucoup plus présente sur le petit écran.

Elle a prêté assez souvent sa voix pour des séries animées, notamment de 2001 à 2005 dans Sourire d’enfer (Braceface).

En 2012 elle joue dans le film de David Cronenberg : Cosmopolis aux côtés de Sarah Gadon, Robert Pattinson et Juliette Binoche.

En 2013 elle obtient un rôle (pour quelques épisodes) dans la série canadienne Rookie Blue, elle revient le temps d’un épisode en 2015.

Depuis 2015 elle interpréte le rôle de Jennifer Goines dans la série de Syfy : 12 Monkeys (adaptation du film de Terry Gilliam).

Elle est à l’affiche de The Death and Life of John.F Donovan de Xavier Dolan, avec Jessica Chastain et Kit Harington (entre autres).